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繼發(fā)性登革熱IgG捕捉法檢測(cè)試劑盒

簡(jiǎn)要描述：

繼發(fā)性登革熱IgG捕捉法檢測(cè)試劑盒
半個(gè)世紀(jì)以來，澳大利亞Panbio公司生產(chǎn)的panbio登革熱檢測(cè)試劑在黃熱病毒實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的創(chuàng)新性一直保持優(yōu)勢(shì)地位。
Panbio公司一直在登革熱診斷試劑產(chǎn)品方面占據(jù)著很大的*。Panbio登革產(chǎn)品擁有廣泛的產(chǎn)品系列，有著廣泛的應(yīng)用。

更新時(shí)間：2025-01-03

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詳細(xì)介紹

繼發(fā)性登革熱IgG捕捉法檢測(cè)試劑盒

檢測(cè)程序

注： 確保所有試劑在開始測(cè)定前平衡至室溫（20-25℃）。在所給時(shí)間和溫度范圍以外進(jìn)行測(cè)試可能產(chǎn)生無效的結(jié)果。不在預(yù)定時(shí)間和溫度范圍內(nèi)的測(cè)試必須進(jìn)行重復(fù)。

ELISA程序

從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板并插入測(cè)試條槽。陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品和校準(zhǔn)品各需5個(gè)微孔，一式三份。確保剩下未使用的微孔密封于鋁箔袋內(nèi)。
使用適當(dāng)?shù)脑嚬芑蛭⒌味ò逑♂岅栃再|(zhì)控品（P）、陰性質(zhì)控品（N）、校準(zhǔn)品（CAL）和患者樣本。
- 混合10μL血清與1000μL樣本稀釋劑。混合均勻。

或者，

混合10μL血清與90μL樣本稀釋劑。取出20μL稀釋血清，加入180μL樣本稀釋劑。混合均勻。

吸取100 µL樣本稀釋劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品添加至對(duì)應(yīng)的微孔中。
蓋住測(cè)定板并在37°C ± 1°C孵育30分鐘。
用稀釋后的清洗緩沖液洗6次（參考清洗程序）。
吸取100 µL HRP標(biāo)記抗人IgG添加到每個(gè)微孔中。
蓋住測(cè)定板并在37°C ± 1°C孵育30分鐘。
用稀釋后的清洗緩沖液洗6次（參考清洗程序）。
吸取100 µL TMB添加到每個(gè)孔中。
在室溫（20-25℃）下孵育10分鐘，從第①次添加開始計(jì)時(shí)。藍(lán)色將會(huì)顯現(xiàn)。
按照相同順序吸取100μL終止液添加到每個(gè)孔中，計(jì)時(shí)同TMB添加步驟。混合均勻。藍(lán)色將變成黃色。
在30分鐘內(nèi)讀取每個(gè)孔在450nm波長(zhǎng)的吸光度，參考濾波器為600-650nm。

注：如果使用雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)，將參考濾波器設(shè)定在600-650nm之間。在沒有參考濾波器的情況下讀取450nm的微孔結(jié)果可能由于背景原因?qū)е挛舛绕摺?/span>

清洗程序

為了清除未復(fù)合的樣本或成分，有效清洗是ELISA程序的關(guān)鍵步驟。

A.自動(dòng)洗板機(jī)

*抽凈所有微孔。
在清洗循環(huán)期間將每個(gè)孔裝滿至邊緣（350μL）。
完成6次清洗后，將測(cè)定板倒立于吸水紙巾上用力敲打，確保清除所有清洗緩沖液。
為了確保有效清洗，必須維持自動(dòng)洗板機(jī)良好的保養(yǎng)。必須始終遵守廠商的清潔說明。

B.手動(dòng)清洗

將測(cè)定板的內(nèi)含物丟棄到適當(dāng)?shù)膹U物容器。
用適當(dāng)?shù)臄D壓瓶將微孔填滿清洗緩沖液。避免清洗緩沖液起泡，否則會(huì)降低清洗效率。立即丟棄微孔里的清洗緩沖液。
再將微孔填滿清洗緩沖液，并立即丟棄。
重復(fù)步驟（3）4次，共用清洗緩沖液清洗六（6）次。
后一次清洗完成后，丟棄微孔的內(nèi)含物并將測(cè)定板置于吸水紙巾上敲打，以確保清除所有清洗緩沖液。

質(zhì)量控制

每個(gè)試劑盒包含校準(zhǔn)品，陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。這些組成的可接受值參見附帶的規(guī)格表。陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品用于監(jiān)測(cè)重大的試劑失敗。陽性質(zhì)控品不能確保測(cè)定臨界值的精密度。如果質(zhì)控品或校準(zhǔn)品的任一吸光度讀數(shù)不符合規(guī)定，則測(cè)試無效且應(yīng)重新測(cè)試。如果測(cè)試無效，則不能報(bào)告患者結(jié)果。必須按照地方、州和/或聯(lián)邦法規(guī)或認(rèn)證要求以及實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)QC程序執(zhí)行質(zhì)控（QC）要求。有關(guān)適當(dāng)?shù)腝C操作規(guī)程指南，建議用戶參考CLSI C24-A和42 CFR 493.1256。

預(yù)期值和測(cè)試局限性

必須結(jié)合患者的臨床體征和癥狀來做臨床診斷。該試劑盒的結(jié)果本身并沒有診斷作用，應(yīng)該與其他臨床數(shù)據(jù)和患者癥狀聯(lián)用。
陽性預(yù)測(cè)值取決于病毒存在的可能性。只能檢測(cè)有臨床癥狀或疑似接觸過相關(guān)病毒的患者。
黃病毒屬內(nèi)的血清型交叉反應(yīng)（登革熱1、2、3、4，日本腦炎，西尼羅河病毒，墨累山谷腦炎等）在IgG，水平上十分常見^3,4,5。在東南亞進(jìn)行的試驗(yàn)表明90%的日本腦炎患者（n=20）的IgG間接結(jié)果大于10 Panbio單位。
利用地方人群測(cè)定了臨界值。人群血清流行病學(xué)在不同地理區(qū)域應(yīng)該隨時(shí)間而變化。終，臨界值需要根據(jù)對(duì)當(dāng)?shù)氐难芯窟M(jìn)行調(diào)整。
尚未確定目測(cè)結(jié)果判定的性能特征。
ELISA篩選試驗(yàn)結(jié)果表明登革熱感染的所有血清必須送到參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行陽性確認(rèn)和流行病學(xué)記錄。

性能特征

用Panbio Dengue IgG Indirect ELISA對(duì)386份經(jīng)過血凝抑制試驗(yàn)（HAI）和ELISA方法的回顧性血清進(jìn)行檢測(cè)。這些血清包括來自以下組別的樣本：108份血清陰性樣本、84份原發(fā)性樣本、94份繼發(fā)性樣本和100份地方性樣本。通過Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 對(duì)這些血清樣本進(jìn)行檢測(cè)并將其結(jié)果與血清的登革熱感染狀態(tài)進(jìn)行對(duì)比，從而確定檢測(cè)的靈敏度、特異性和一致性。數(shù)據(jù)總結(jié)于表1。