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登革熱抗原NS1早期檢測試劑

Panbio Dengue Early ELISA

產品目錄號 01PE40

預期用途

Panbio Dengue EARLY ELISA 是一種登革熱NS1 抗原捕獲 ELISA。 用于定性檢測血清中的 NS1 抗原， 輔助臨床實驗室診斷出現登革熱臨床癥狀的患者。 Panbio Dengue EARLY ELISA 應該與其它登革熱血清診斷法聯用。

概述

登革熱病毒是黃病毒屬，主要分布于熱帶和亞熱帶地區。世界上一半以上的人口居住于具有登革熱潛在傳播風險的地區，登革熱是導致人類發病和死亡嚴峻的蟲媒病毒疾病 ¹。登革熱病毒有 4 種不同但抗原相關的血清型，通過蚊（主要是埃及伊蚊、白紋伊蚊傳播和波利尼西亞斑蚊）傳播。

登革熱病毒感染的臨床表現各不相同，從亞臨床表現到致命。依據嚴重程度，該疾病被分為以下等級：非特異性發熱疾病，典型登革熱，登革出血熱（DHF）（1 級和 2 級），和登革休克綜合征（DSS）（3 級和 4 級）¹。典型登革熱的特征是突然發熱并至少伴隨以下 2 種癥狀：頭痛、眼眶后疼痛、肌痛、關節痛、皮疹、出血表現或白血球減少癥 ²。雙相發熱病程常見失眠和厭食，失去味覺或口苦。DHF 和 DSS 是嚴重的潛在致命性并發癥，通常與感染第二種血清型有關 ³。

登革熱的早期診斷允許進行早期的支持療法和監控。這降低了 DHF 或DDS 等并發癥發生的風險，尤其是在登革熱流行的國家 ⁴。

通過ELISA 檢測登革熱NS1 抗原是一種非常重要的方法，因為它能夠在血清轉化之前進行感染檢測。 從發病后的第 1 天直到第 9 天都能在血清中檢測到NS1 抗原 ^5,6,7（見圖示）。這區別于 IgM 抗體，因為 IgM 抗體直到發病后 3-5 天后才檢測得到。繼發性登革熱病毒感染的特征是高 IgG ， 水平且其峰值檢測窗口是在發病后的 6-15 天。這可能伴隨著 IgM 水平升高 ^10,11。Panbio Dengue IgG Capture ELISA 用于檢測登革熱感染的 IgG 抗體水平相對于閾值特異性升高。該試驗不用于檢測既往感染引起的低水平 IgG 抗體，這種情況通常見于地方性流行區的較多人群。為了為準確地從發病后的不同階段診斷登革熱患者，應該使用Panbio Dengue EARLY ELISA (01PE40)，Panbio Dengue lgM Capture ELISA (01PE20) 和 Panbio Dengue lgG Capture ELISA (01PE10)三者相結合的方法。

檢測原理

血清中存在的登革熱 NS1 抗原，與微孔板上聚苯乙烯表面附著的抗 NS1 抗體相結合。洗去剩余的血清并添加 HRP 標記的抗 NS1 單克隆抗體。在培養完成后清洗微孔，再添加無色的底物系統 - 四甲基聯苯胺/ 過氧化氫（TMB 顯色液）。底物被酶水解后，TMB 顯色液變藍。用酸終止反應后，TMB 變黃。顯色表示測試樣本中存在登革熱NS1 抗原。

提供的材料

• 抗 NS1 抗體包被微孔板（12x8 孔）- 微孔板由抗 NS1 抗體包被。即用型。未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環境中。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。
• HRP 標記抗 NS1 單克隆抗體– 1 瓶，15mL（橙色）。 辣根過氧化物酶（HRP）標記抗 NS1 單克隆抗體，含防腐劑（0.1% Proclin™）。即用型。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。
• 清洗緩沖液（20 倍） - 1 瓶，60mL 20 倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20 和防腐劑（0.1% Proclin™）。低溫可能結晶。若去除結晶，可在 37℃孵育液體至澄清?；旌暇鶆颉Ｓ?19 體積的蒸餾水稀釋 1 體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在 2-25℃儲存一周。
• 樣本稀釋劑– 1 瓶，22mL（棕色）。即用型。Tris 緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。
• TMB 顯色液（TMB） - 1 瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯苯胺和過氧化氫的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。
• 陽性質控品– 1 瓶，紫色瓶蓋，1.2mL 重組抗原（含 0.1%Proclin™和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。
• 校準品– 2 瓶，橙色瓶蓋，1.5mL 重組抗原（含 0.1%Proclin™和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

8. 陰性質控品– 1 瓶，白色瓶蓋，1.2mL 人血清（含 0.1%疊氮話鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

• 終止液 – 1 瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M 磷酸。有效期內儲存于 2-25℃可保持穩定。

Proclin™ 300 是 Rohm 和 Haas 公司的注冊商標。

需要但未提供的材料

1. 精確、可調節的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000μL 容積）

2. 去離子水

3. 標板清洗系統

4. 酶標儀，含 450nm 濾波器

5. 計時器

6. 刻度量筒

7. 燒瓶

8. 用于稀釋的試管或微滴定板

注意事項

用于體外診斷

• 在制備質控品的過程中使用的所有人源性材料已經過人類免疫缺陷病毒 1 和 2（HIV 1 和 2）抗體、丙肝（HCV）和乙肝表面抗原的檢測，結果為陰性。但是，任何測試方法都不能*確信，且所有人源性質控品和抗原都應按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預防中心以及美國國立衛生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級 ¹² 處理。
• 該測試只能使用血清執行。尚未建立使用全血、血漿或其它標本基質的方法。

3. 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現溶血或微生物生長的血清。

4. 不可加熱，否則血清將失去活性。

5. 在開始檢測前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測受溫度變化的影響。微孔板在達到室溫

（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。

6. 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉移試劑可能導致污染。

7. 未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環境中。否則將產生錯誤結果。

8. 底物系統：

(a) 由于 TMB 易受金屬離子的污染，所以底物系統不能與金屬表面接觸。

(b) 避免長時間陽光直射。

(c) 有些清潔劑可干擾 TMB 的性能。

TMB 可能呈現淡藍色，這不影響底物的活性或測定結果。

9. 某些試劑盒組成包含疊氮話鈉，疊氮話鈉可能與鉛或銅管反應形成極易爆炸的金屬疊氮話合物。通過管道裝置處理這些試劑時，請用大量清水沖洗以避免疊氮化物在排水管內累積。

10. 疊氮話鈉還抑制酶標物的活性。在添加酶標物時必須使用干凈的吸液頭，避免攜帶其它試劑的疊氮話鈉。

登革熱抗原NS1早期檢測試劑